Efecto de pronutrientes inmunoestimulantes en macrófagos
INTRODUCCIÓN
Este ensayo in vitro, realizado en un laboratorio privado en España en 2015, busca revelar los mecanismos moleculares por los que un producto rico en pronutrientes causa un efecto inmunoestimulante en los animales. Los pronutrientes son moléculas de origen botánico que producen la activación celular de una célula diana, que en este caso son los macrófagos, e inducen un incremento en la traducción de RNA a proteínas. Para calcular el efecto de los pronutrientes sobre la tasa de traducción mRNA-proteína, se utilizó una técnica llamada SunSET (Surface Sensing of Translation).
La técnica SunSET es un método no radiactivo para monitorear la síntesis proteica en poblaciones celulares, basada en el uso de puromicina. La puromicina es un análogo del tirosil-tRNA que puede incorporarse a proteínas de nueva síntesis mediante un enlace peptídico, por lo que la detección de la puromicina mediante un anticuerpo anti-puromicina (técnica llamada ELISA Western Blot) puede correlacionarse con la tasa de traducción mRNA-proteína.
Imagen 1: Síntesis proteica y proteína con puromicina.
Imagen 1: Síntesis proteica y proteína con puromicina
protocolo
Los ensayos in vitro se realizaron en 12-pocillos, donde se añadieron 1.2×105 céls/ml en un volumen final de 2ml por pocillo.
Tras 4 días de cultivo, se observó confluencia y el medio se sustituyó con diferentes suplementos, siguiendo el esquema descrito a continuación:
ENSAYO A (Control): Se añade únicamente puromicina.
ENSAYO B (Muestras): Se añade la puromicina y el inmunoestimulante natural.
ENSAYO C (Control). Se añade puromicina y cicloheximida. La cicloheximida es un inhibidor de la síntesis proteica.
RESULTADOS (Imagen 2)
El ensayo A nos indica la síntesis proteica básica gracias a la puromicina como marcador.
El ensayo B muestra un incremento en la síntesis proteica (nº 2 y 3, marcados con una estrella) con el uso de pronutrientes inmunoestimulantes, gracias al marcador de la puromicina.
El ensayo C sirve para comprobante para la inhibición de la síntesis proteica causado por la administración de cicloheximida.
Imagen 2: Resultados Western Blot
CONCLUSIONES
Como conclusión, podemos decir que los pronutrientes inmunoestimulantes aumentan la tasa de traducción mRNA-proteína. Una tasa más elevada de traducción mRNA-proteína se correlaciona con un incremento de la producción de proteínas tejido-específicas y, por tanto, un mejor rendimiento del órgano diana. Esta mejora a nivel fisiológico permite una mayor resistencia a enfermedades infecciosas y una disminución en la mortalidad en la granja.
